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蛋白質飼料測定飼料粗蛋白

蛋白質飼料測定飼料粗蛋白

飼料—粗蛋白含量的測定——凱氏法

1、范圍

 本方法規定了飼料中粗蛋白含量的測定。

 本方法適用于配合飼料、濃縮飼料和單一飼料。

2、引用標準

 GB601 化學試劑滴定分析用標準溶液的制備

3、原理

在催化劑作用下,用硫酸破壞有機物,使含氮物轉化成硫酸銨。加入強堿進行蒸餾使氨逸出,用硼酸吸收液吸收后,再用鹽酸標準溶液滴定。測出氮含量,將結果乘以換算系數6.25,計算出粗蛋白的含量。

4、試劑

蛋白質飼料測定飼料粗蛋白分析中,除另有說明外,僅使用化學純的試劑和蒸餾水或與其純度相當的水。

4.1 硫酸,ρ約1.84g/mL

4.2 混合催化劑

稱取0.4g 硫酸銅(CuSO4·5H2O),6g硫酸鉀或硫酸鈉,磨碎混勻。

4.3 氫氧化鈉溶液,400g/L

4.4 硼酸溶液,20g/L

4.5 混合指示劑溶液

甲基紅乙醇溶液(1g/L),溴甲酚綠乙醇溶液(5g/L),兩溶液等體積混合,在陰涼處保存期為三個月。

4.6 鹽酸標準溶液,C(HCl)=0.1mol/L、0.02mol/L

4.6.1 配制C(HCl)=0.1mol/L

移取8.3mL鹽酸(分析純),于1000mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,混勻。此溶液為C(HCl)=0.1mol/L。

4.6.2 配制C(HCl)=0.02mol/L

移取1.67mL鹽酸(分析純),于1000mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,混勻。此溶液為C(HCl)=0.02mol/L。

4.7 蔗糖,分析純

4.8 硫酸銨,分析純,干燥

4.9 硼酸吸收液

1000mL硼酸水溶液(10g/L)中加入10mL 溴甲酚綠乙醇溶液(1g/L),7mL甲基紅乙醇溶液(1g/L),0.5mL氫氧化鈉水溶液(40g/L),混勻,置陰涼處保存期為一個月(全自動程序用)。

5、蛋白質飼料測定飼料粗蛋白的儀器設備

5.1 實驗室用樣品粉碎機或研缽

5.2 分樣篩,孔徑0.45mm(40)

5.3 分析天平,感量0.0001g

5.4 消煮爐或電爐

5.5 滴定管,酸式,10、25mL

5.6 凱氏燒瓶,250mL

5.7 凱氏蒸餾裝置,常量直接蒸餾式或半微量水蒸氣蒸餾式

5.8 錐形瓶,150、250mL

5.9 容量瓶,100mL

5.10 消煮管,250mL

5.11 定氮儀,以凱氏原理制造的各類型半自動,全自動蛋白質測定儀

6、蛋白質飼料測定飼料粗蛋白試樣制備

選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200g,粉碎后全部通過0.45mm(40目篩),裝于密封容器中, 防止試樣成分的變化。

7、操作步驟

7.1 仲裁法

7.1.1 試樣的消煮

稱取試料0.51g(含氮量580mg)準確至0.0002g,放入凱氏燒瓶中,加入6.4g混合催化劑,與試樣混合均勻,再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠,將凱氏燒瓶置于電爐上加熱,開始小火,待樣品焦化,泡沫消失后,再加強火力(360410)直至呈透明的藍綠色,然后再繼續加熱,至少2h。

7.1.2 氨的蒸餾

7.1.2.1 常量蒸餾法  

將試料消煮液冷卻,加入60100mL蒸餾水,搖勻,冷卻。將凱氏蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有25mL硼酸吸收液(20g/L)2滴混合指示劑溶液的錐形瓶內。然后小心地向凱氏燒瓶中加入50mL氫氧化鈉溶液(400g/L),輕輕搖動凱氏燒瓶,使液溶混勻后再加熱蒸餾,直至流出液體積為100mL。降下錐瓶,使冷凝管末端離開液面,繼續蒸餾12min,并用蒸餾水沖洗冷凝管末端,洗液均需流入錐形瓶內, 然后停止蒸餾。

7.1.2.2 半微量蒸餾法將試樣消煮液冷卻,加入20mL蒸餾水,轉入100mL容量瓶中,冷卻后用水稀釋至刻度,搖勻,做為試料分解液。將半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有20mL硼酸吸收液(20g/L)2滴混合指示劑溶液的錐形瓶內。蒸汽發生器的水中應加入甲基紅指示劑數滴,硫酸數滴,在蒸餾過程中保持此液為橙紅色, 否則需補加硫酸。準確移取1020mL試料分解液注入凱氏蒸餾裝置的反應室中,用少量蒸餾水沖洗進樣入口,塞好入口玻璃塞,再加10mL氫氧化鈉溶液(400g/L),小心提起玻璃塞使之流入反應室,將玻璃塞塞好,且在入口處加水密封,防止漏氣。蒸餾4min,降下錐形瓶,使冷凝管末端離開吸收液面,再蒸餾1min,用蒸餾水沖洗冷凝管末端,洗液均流入錐形瓶內,然后停止蒸餾。

注:7.1.2.1 7.1.2.2 蒸餾法測定結果相近,可任選一種。

7.1.2.3 蒸餾步驟的檢驗

準確稱取0.2g硫酸銨,代替試料,按7.1.27.2.2步驟進行操作,測得硫酸銨的質量分數為21.19±0.2%,否則應檢查加堿、蒸餾和滴定各步驟是否正確。

7.1.3 滴定

7.1.2.17.1.2.2法蒸餾后的吸收液立即用鹽酸標準溶液(0.1mol/L0.02mol/L)滴定,溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。

7.2 推薦法

7.2.1 蛋白質飼料測定飼料粗蛋白試樣的消煮

稱取0.51g試料(含氮量580mg)準確至0.0002g,放入消化管中,加2片消化片(儀器自備)6.4g混合催化劑,12mL硫酸,于420℃下在消煮爐上消化1h。取出放涼后加入30mL 蒸餾水。

7.2.2 氨的蒸餾

采用全自動定氮儀時,按儀器本身常量程序進行測定。

采用半自動定氮儀時,將帶消化液的管子插在蒸餾裝置上,以25mL硼酸溶液(20g/L)為吸收液,加入2滴混合指示劑溶液,凱氏蒸餾裝置的冷凝管末端要浸入裝有吸收液的錐形瓶內,然后向消煮管中加入50mL氫氧化鈉溶液(400g/L)進行蒸餾。蒸餾時間以吸收液體積達到100mL時為宜。降下錐形瓶,用蒸餾水沖洗冷凝管末端,洗液均需流入錐形瓶內。

7.2.3 滴定

用標準鹽酸溶液(0.1mol/L)滴定吸收液,溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。

8、空白測定

稱取0.5g蔗糖,代替試料,按第7章進行空白測定,消耗鹽酸標準溶液(0.1mol/L)的體積不得超過0.02mL。消耗鹽酸標準溶液(0.02mol/L)體積不得超過0.3mL。

9、蛋白質飼料測定飼料粗蛋白結果計算

按下式計算粗蛋白質的質量分數:

  粗蛋白質(%)=0.0140×6.25×100V(V2-V1)C/MV/

式中:V2——滴定試樣時所需標準酸溶液體積,mL;

V1——滴定空白時所需標準酸溶液體積,mL;

C ——鹽酸標準溶液濃度,mol/L;

m ——試樣質量,g;

V ——試樣分解液總體積,mL;

V′——試樣分解液蒸餾用體積,mL;

0.0140——與1.00mL鹽酸標準液[C(HCl)=1.000mol/L]相當的、以克表示的氮的質量。

6.25——氮換算成蛋白質的平均系數。

10、蛋白質飼料測定飼料粗蛋白的精密度

每個試樣取兩個平行樣進行測定,以其算術平均值為結果。

當粗蛋白質含量在25%以上時,允許相對偏差為1%。

當粗蛋白質含量在10%25%之間時,允許相對偏差為2%。

當粗蛋白質含量在10%以下時,允許相對偏差為3%。

11、參考文獻

GB/T 6432-94 飼料中粗蛋白測定方法